• 9 czerwca, 2022

Oznaczanie ilościowe histaminy, tryptazy i chymazy u rozproszonego człowieka

    • Poziomy histaminy, chymazy i tryptazy oceniano w preparatach rozproszonych ludzkich komórek tucznych TC (tryptaza+, chymaza+) uzyskanych z napletka i rozproszonych ludzkich komórek tucznych T (tryptaza+, chymaza-) uzyskanych z płuc. Zgodnie z wcześniejszymi wynikami badań immunohistochemicznych, ekstrakty komórek tucznych T, dominujący typ komórek tucznych w płucach (93% T i 7% komórek tucznych TC), wykazywały niedobór ludzkiej chimazy (mniej niż 0,3 mikrograma i 0,04 U/10(6)). komórek), ale nie tryptazy (10,8 mikrogramów i 0,3 U/10(6) komórek tucznych) przez odpowiednie immunologiczno-enzymatyczne ( suc -L- ala – ala -pro-phe-p-nitroanilid w obecności aprotyniny i tosyl-L- oznaczenia gly-pro-lys-p-nitroanilidu w obecności, odpowiednio, inhibitora trypsyny z soi.
    • Niewielką obecność aktywności chimazy w płucach można wytłumaczyć niewielką obecnością komórek tucznych TC płuc. Ekstrakty komórek tucznych TC, dominujący typ komórek tucznych (1% T i 99% TC) w napletku, zawierały obie proteazy.
    • Jednak mastocyty TC z dorosłego napletka zawierały ośmiokrotnie do 10-krotnie wyższy poziom chimazy (4,5 mikrograma i 1,01 U/10(6)) i 2-krotnie do 3-krotnie wyższy poziom tryptazy (11,5 mikrograma i 0,27 U/10(6). ) mastocyty) niż mastocyty TC z nowonarodzonego napletka (mniej niż 0,6 mikrograma i 0,09 U chymazy oraz 35 mikrogramów i 0,62 U tryptazy/10(6) komórek tucznych).
    • W przeciwieństwie do tego, poziomy histaminy nie różniły się znacząco w TC napletka dorosłego (1,9 mikrograma/10(6) komórek tucznych), TC napletka noworodka (1,6 mikrograma/10(6) komórek tucznych) i T płuca dorosłego (1,5 mikrograma/10(6)( 6) mastocyty) mastocyty.
    • Względny stosunek każdego mediatora w komórkach tucznych napletka noworodka do tego w komórkach tucznych napletka dorosłego jest najwyższy dla histaminy, następnie tryptazy, a następnie chimazy. Tryptaza z komórek tucznych TC i T miała identyczny skład podjednostek w analizie Western blot i podobne widoczne aktywności specyficzne. Badanie to rozszerza wcześniej opisane immunohistochemiczne rozróżnienie między ludzkimi komórkami tucznymi T i TC w skrawkach tkankowych przez bezpośrednie oznaczenie ilościowe chymazy i tryptazy w rozproszonych preparatach komórek tucznych T i TC.

Specyficzność substratowa aktywności cis-trans izomerazy peptydyloprolilowej cyklofiliny i białka wiążącego FK-506: dowód na istnienie rodziny różnych enzymów.

  1. U ssaków rodzina endotelin (ET) obejmuje trzy endogenne izoformy: ET-1, ET-2 i ET-3. ET-1 jest główną izoformą w ludzkim układzie sercowo-naczyniowym i pozostaje najsilniejszym i najdłużej odkrytym czynnikiem zwężającym naczynia ludzkie.
  2. U ludzi endoteliny pośredniczą w ich działaniach za pośrednictwem tylko dwóch typów receptorów, które zostały sklonowane i sklasyfikowane jako receptory ET(A) i ET(B) w pierwszym raporcie NC-IUPHAR (International Union of Pharmacology Committee on Receptor Nomenclature and Drug Classification) w sprawie nomenklatury w 1994 roku.
  3. Ten raport został skompilowany przed odkryciem większości antagonistów receptora endoteliny (zwłaszcza niepeptydów) obecnie stosowanych w charakterystyce receptorów i obecnie zaktualizowany w niniejszym przeglądzie.
  4. Receptory endoteliny nadal klasyfikuje się zgodnie z ich rangą siły działania dla trzech endogennych izoform endoteliny. Nie odkryto selektywnego agonisty receptora ET(A), ale wysoce selektywni antagoniści obejmują peptydy (BQ123, cyklo-[D-Asp-L-Pro-D-Val-L-Leu-D-Trp-]; FR139317, N – [(heksahydro-1-azepinylo)karbonylo]L-Leu(1-Me)D-Trp-3(2-pirydylo)-D- Ala ) i ogólnie silniejsze niepeptydy, takie jak PD156707, SB234551, L754142, A127722 oraz TBC11251. Sarafotoksyna S6c, BQ3020 ([ Ala (11,15)]Ac-ET-1((6-21)) i IRL1620 [ Suc -(Glu(9),  Ala (11,15))-ET-1( (8-21))] są szeroko stosowanymi syntetycznymi agonistami receptora ET(B).
  5. Opracowano również ograniczoną liczbę peptydowych (BQ788) i niepeptydowych (A192621) antagonistów ET(B). Są one na ogół słabsze niż antagoniści ET(A) i wykazują niższą selektywność (zwykle tylko 1 do 2 rzędów wielkości) wobec receptora ET(B). Radioligandy wysoce selektywne wobec receptorów ET(A) ((125)I-PD151242, (125)I-PD164333 i (3)H-BQ123) lub ET(B) ((125)I-BQ3020 i (125)I -IRL1620) dodatkowo skonsolidowały klasyfikację tylko na te dwa typy, bez mocnych dowodów molekularnych lub farmakologicznych na poparcie istnienia dalszych receptorów u ssaków.

Białko mip Legionella pneumophila wykazuje aktywność izomerazy peptydylo-prolilo-cis/trans (PPlaza).

  • Legionella pneumophila jest pasożytem wewnątrzkomórkowym, zdolnym do przeżycia i namnażania się w ludzkich monocytach i makrofagach pęcherzykowych. Wykazano, że białko Mip (potencjator zakaźności makrofagów) jest istotnym czynnikiem wirulencji.
  • Poszukiwanie baz danych kwasów nukleinowych po translacji wykazało, że białko Mip ze szczepu Wadsworth posiada regiony homologiczne do tych występujących w białkach wiążących FK506 (FKBP) kilku różnych organizmów eukariotycznych.
  • FKBP są zdolne do wiązania się z immunosupresyjnym makrolidem FK506 i posiadają aktywność cis/trans izomerazy peptydylo-prolilowej (PPIazy). Gen kodujący białko Mip został sklonowany z chromosomu szczepu Philadelphia I L. pneumophila i zsekwencjonowany.
  • Został zsyntetyzowany w Escherichia coli K-12 i po oczyszczeniu wykazywał aktywność PPIazy katalizującą powolną izomeryzację cis/trans prolilowych wiązań peptydowych w oligopeptydach. Mip jest hamowany przez FK506 i jest w pełni oporny na cyklosporynę A, co stwierdzono również w przypadku niedawno scharakteryzowanych PPIaz typu FKBP eukariontów.
  • Jednak N-końcowe wydłużenie Mip i/lub podstawienie zmiennych aminokwasów w C-końcowym rdzeniu FKBP prowadzi do różnic w specyficzności substratowej w porównaniu z eukariotycznymi FKBP z substratami oligopeptydowymi typu  Suc – Ala –Xaa -Pro-Phe-4-nitroanilid.
  • Niemniej jednak czynnik Legionella Mip reprezentuje produkt genu bakteryjnego, który ma pewne cechy normalnie występujące w białkach eukariotycznych. Ze względu na aktywność PPIaz w reakcjach fałdowania białek, takie prokariotyczne analogi FKBP mogą reprezentować nową klasę czynników patogenności bakterii.

Izomeraza peptydylo-prolilowa cis/trans związana z rybosomami zidentyfikowana jako czynnik wyzwalający.

  • Izomerazy cis/trans peptydylo-prolilowe (PPIazy) są enzymami, które katalizują fałdowanie białek zarówno in vitro, jak i in vivo. Wyizolowaliśmy peptydylo-prolilową izomerazę cis/trans (PPIaza), która jest specyficznie związana z podjednostką 50S rybosomu Escherichia coli.
  • To powiązanie zostało zniesione przez dodanie co najmniej 1,5 M LiCl. Sekwencjonowanie N-końcowych aminokwasów w połączeniu z trzema fragmentami proteolitycznymi o łącznej liczbie 62 aminokwasów ujawniło, że ta PPIaza jest identyczna z czynnikiem wyzwalającym E. coli. Porównanie sekwencji aminokwasowej czynnika wyzwalającego z sekwencjami innych rodzin PPIaz wykazuje niewielkie podobieństwa, co sugeruje, że czynnik wyzwalający może reprezentować dodatkową rodzinę PPIaz.
  • Czynnik wyzwalający oczyszczono do jednorodności w skali preparatywnej z E.coli i zbadano jego właściwości enzymatyczne. W swoim działaniu wobec substratów oligopeptydowych czynnik wyzwalający przypomina białka wiążące FK506 (FKBP). Dodatkowo wzór specyficzności submiejsc względem aminokwasu poprzedzającego prolinę w  Suc – Ala -Xaa-Pro-Phe-4-nitroanilidach przypomina FKBP.

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA

L-1400.0050 Bachem 50.0mg 151 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA

L-1400.0250 Bachem 250.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA

L-1400.1000 Bachem 1.0g 1118 EUR

Suc-Ala-Phe-Pro-Phe-pNA

L-1605.0050 Bachem 50.0mg 454 EUR

Suc-Ala-Phe-Pro-Phe-pNA

L-1605.0250 Bachem 250.0mg 1723 EUR

Suc-Ala-Ala-Phe-pNA

L-1580.0250 Bachem 250.0mg 877 EUR

Suc-Ala-Ala-Phe-pNA

L-1580.1000 Bachem 1.0g 2569 EUR

Suc-Phe-Ala-Ala-Phe-pNA

L-1675.0050 Bachem 50.0mg 151 EUR

Suc-Phe-Ala-Ala-Phe-pNA

L-1675.0250 Bachem 250.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Ala-pNA

L-1775.0250 Bachem 250.0mg 660 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Ala-pNA

L-1775.1000 Bachem 1.0g 1917 EUR

Suc-Ala-Gly-Pro-Phe-pNA

L-1590.0050 Bachem 50.0mg 273 EUR

Suc-Ala-Gly-Pro-Phe-pNA

L-1590.0250 Bachem 250.0mg 998 EUR

Suc-Ala-His-Pro-Phe-pNA

L-1595.0050 Bachem 50.0mg 454 EUR

Suc-Ala-His-Pro-Phe-pNA

L-1595.0250 Bachem 250.0mg 1723 EUR

Suc-Ala-Gln-Pro-Phe-pNA

L-1600.0050 Bachem 50.0mg 708 EUR

Suc-Ala-Gln-Pro-Phe-pNA

L-1600.0250 Bachem 250.0mg 2739 EUR

Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-pNA

L-1620.0050 Bachem 50.0mg 273 EUR

Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-pNA

L-1620.0250 Bachem 250.0mg 998 EUR

Suc-Ala-Val-Pro-Phe-pNA

L-1625.0050 Bachem 50.0mg 576 EUR

Suc-Ala-Val-Pro-Phe-pNA

L-1625.0250 Bachem 250.0mg 2207 EUR

Suc-Ala-Lys-Pro-Phe-pNA

L-1630.0050 Bachem 50.0mg 708 EUR

Suc-Ala-Lys-Pro-Phe-pNA

L-1630.0250 Bachem 250.0mg 2739 EUR

Suc-Ala-Glu-Pro-Phe-pNA

L-1635.0050 Bachem 50.0mg 563 EUR

Suc-Ala-Glu-Pro-Phe-pNA

L-1635.0250 Bachem 250.0mg 2159 EUR

Suc-Ala-Ile-Pro-Phe-pNA

L-1665.0050 Bachem 50.0mg 576 EUR

Suc-Ala-Ile-Pro-Phe-pNA

L-1665.0250 Bachem 250.0mg 2207 EUR

Suc-Ala-Trp-Pro-Phe-pNA

L-1670.0050 Bachem 50.0mg 708 EUR

Suc-Ala-Trp-Pro-Phe-pNA

L-1670.0250 Bachem 250.0mg 2739 EUR

Suc-Ala-Pro-pNA

L-2090.0050 Bachem 50.0mg 454 EUR

Suc-Ala-Pro-pNA

L-2090.0250 Bachem 250.0mg 1723 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-pNA

L-1390.0050 Bachem 50.0mg 151 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-pNA

L-1390.0250 Bachem 250.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-pNA

L-1390.1000 Bachem 1.0g 1118 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Met-pNA

L-1395.0050 Bachem 50.0mg 334 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Met-pNA

L-1395.0250 Bachem 250.0mg 1180 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Glu-pNA

L-1710.0050 Bachem 50.0mg 563 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Glu-pNA

L-1710.0250 Bachem 250.0mg 2159 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Arg-pNA

L-1720.0050 Bachem 50.0mg 660 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Arg-pNA

L-1720.0250 Bachem 250.0mg 2545 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Lys-pNA

L-1725.0050 Bachem 50.0mg 563 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Lys-pNA

L-1725.0250 Bachem 250.0mg 2159 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA

L-1770.0250 Bachem 250.0mg 660 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA

L-1770.1000 Bachem 1.0g 1917 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Nva-pNA

L-1780.0250 Bachem 250.0mg 708 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Nva-pNA

L-1780.1000 Bachem 1.0g 2062 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Ile-pNA

L-1790.0250 Bachem 250.0mg 841 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Ile-pNA

L-1790.1000 Bachem 1.0g 2461 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Asp-pNA

L-1835.0050 Bachem 50.0mg 708 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Asp-pNA

L-1835.0250 Bachem 250.0mg 2739 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Abu-pNA

L-2160.0500 Bachem 0.5mg 60 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Abu-pNA

L-2160.1000 Bachem 1.0mg 83 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-AMC

I-1465.0050 Bachem 50.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-AMC

I-1465.0250 Bachem 250.0mg 1482 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-SBzl

M-1735.0050 Bachem 50.0mg 877 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-SBzl

M-1735.0250 Bachem 250.0mg 3416 EUR

Suc-Ala-Ala-pNA

L-1505.0250 Bachem 250.0mg 225 EUR

Suc-Ala-Ala-pNA

L-1505.1000 Bachem 1.0g 611 EUR

Suc-Ala-Ala-Ala-pNA

L-1385.0250 Bachem 250.0mg 225 EUR

Suc-Ala-Ala-Ala-pNA

L-1385.1000 Bachem 1.0g 611 EUR

Suc-APA-pNA peptide [Suc-Ala-Pro-Ala-pNA; MW: 477.5]

SP-51205-1 Alpha Diagnostics 1 mg 141 EUR

Ac-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA

L-1010.0050 Bachem 50.0mg 576 EUR

Ac-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA

L-1010.0250 Bachem 250.0mg 2207 EUR

Suc-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-pNA

L-1325.0025 Bachem 25.0mg 708 EUR

Suc-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-pNA

L-1325.0100 Bachem 100.0mg 2061 EUR

Suc-Ala-Ala-Val-Ala-pNA

L-1410.0050 Bachem 50.0mg 151 EUR

Suc-Ala-Ala-Val-Ala-pNA

L-1410.0250 Bachem 250.0mg 515 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-2,4-difluoroanilide

M-2305.0050 Bachem 50.0mg 841 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-2,4-difluoroanilide

M-2305.0250 Bachem 250.0mg 3270 EUR

Suc-Ala-Ala-Val-pNA

L-1405.0050 Bachem 50.0mg 151 EUR

Suc-Ala-Ala-Val-pNA

L-1405.0250 Bachem 250.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Ala-Val-pNA

L-1405.1000 Bachem 1.0g 1118 EUR

H-Ala-Phe-Pro-pNA

L-1795.0050 Bachem 50.0mg 236 EUR

H-Ala-Phe-Pro-pNA

L-1795.0250 Bachem 250.0mg 853 EUR

H-Phe-Pro-Ala-pNA

L-1800.0050 Bachem 50.0mg 297 EUR

H-Phe-Pro-Ala-pNA

L-1800.0250 Bachem 250.0mg 1093 EUR

Suc-Ala-Ala-Phe-AMC

I-1315.0050 Bachem 50.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Ala-Phe-AMC

I-1315.0250 Bachem 250.0mg 1482 EUR

Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-AMC

I-1695.0050 Bachem 50.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-AMC

I-1695.0250 Bachem 250.0mg 1482 EUR

Suc-Ala-Glu-Pro-Phe-AMC

I-1750.0050 Bachem 50.0mg 841 EUR

Suc-Ala-Glu-Pro-Phe-AMC

I-1750.0250 Bachem 250.0mg 3270 EUR

Suc-Ala-Pro-Ala-AMC

I-1335.0050 Bachem 50.0mg 683 EUR

Suc-Ala-Pro-Ala-AMC

I-1335.0250 Bachem 250.0mg 2642 EUR

Suc-Phe-Pro-Phe-pNA

L-1430.0250 Bachem 250.0mg 841 EUR

Suc-Phe-Pro-Phe-pNA

L-1430.1000 Bachem 1.0g 2461 EUR

Boc-Ala-Ala-Pro-Ala-pNA

L-1180.0050 Bachem 50.0mg 357 EUR

Boc-Ala-Ala-Pro-Ala-pNA

L-1180.0250 Bachem 250.0mg 1336 EUR

H-Ala-Ala-Phe-pNA

L-1095.0050 Bachem 50.0mg 115 EUR

H-Ala-Ala-Phe-pNA

L-1095.0250 Bachem 250.0mg 368 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC

I-1490.0050 Bachem 50.0mg 841 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC

I-1490.0250 Bachem 250.0mg 3270 EUR

Suc-Val-Pro-Phe-pNA

L-1755.0050 Bachem 50.0mg 841 EUR

Suc-Val-Pro-Phe-pNA

L-1755.0250 Bachem 250.0mg 3270 EUR

H-Ala-Ala-Pro-pNA · HCl

L-1100.0050 Bachem 50.0mg 576 EUR

H-Ala-Ala-Pro-pNA · HCl

L-1100.0250 Bachem 250.0mg 2207 EUR

MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA

L-1335.0050 Bachem 50.0mg 334 EUR

MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA

L-1335.0250 Bachem 250.0mg 1180 EUR

H-Ala-Pro-pNA

L-1115.0250 Bachem 250.0mg 176 EUR

H-Ala-Pro-pNA

L-1115.1000 Bachem 1.0g 466 EUR

Jednak aktywność PPIazy czynnika wyzwalającego nie była hamowana ani przez FK506, ani przez cyklosporynę A w stężeniach do 100 mikroM. In vitro czynnik wyzwalający katalizował ograniczone proliną ponowne fałdowanie wariantu RNazy T1 znacznie lepiej niż wszystkie inne PPIazy, które do tej pory zbadano.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.