• June 9, 2022

Oznaczanie ilościowe histaminy, tryptazy i chymazy u rozproszonego człowieka

    • Poziomy histaminy, chymazy i tryptazy oceniano w preparatach rozproszonych ludzkich komórek tucznych TC (tryptaza+, chymaza+) uzyskanych z napletka i rozproszonych ludzkich komórek tucznych T (tryptaza+, chymaza-) uzyskanych z płuc. Zgodnie z wcześniejszymi wynikami badań immunohistochemicznych, ekstrakty komórek tucznych T, dominujący typ komórek tucznych w płucach (93% T i 7% komórek tucznych TC), wykazywały niedobór ludzkiej chimazy (mniej niż 0,3 mikrograma i 0,04 U/10(6)). komórek), ale nie tryptazy (10,8 mikrogramów i 0,3 U/10(6) komórek tucznych) przez odpowiednie immunologiczno-enzymatyczne ( suc -L- ala – ala -pro-phe-p-nitroanilid w obecności aprotyniny i tosyl-L- oznaczenia gly-pro-lys-p-nitroanilidu w obecności, odpowiednio, inhibitora trypsyny z soi.
    • Niewielką obecność aktywności chimazy w płucach można wytłumaczyć niewielką obecnością komórek tucznych TC płuc. Ekstrakty komórek tucznych TC, dominujący typ komórek tucznych (1% T i 99% TC) w napletku, zawierały obie proteazy.
    • Jednak mastocyty TC z dorosłego napletka zawierały ośmiokrotnie do 10-krotnie wyższy poziom chimazy (4,5 mikrograma i 1,01 U/10(6)) i 2-krotnie do 3-krotnie wyższy poziom tryptazy (11,5 mikrograma i 0,27 U/10(6). ) mastocyty) niż mastocyty TC z nowonarodzonego napletka (mniej niż 0,6 mikrograma i 0,09 U chymazy oraz 35 mikrogramów i 0,62 U tryptazy/10(6) komórek tucznych).
    • W przeciwieństwie do tego, poziomy histaminy nie różniły się znacząco w TC napletka dorosłego (1,9 mikrograma/10(6) komórek tucznych), TC napletka noworodka (1,6 mikrograma/10(6) komórek tucznych) i T płuca dorosłego (1,5 mikrograma/10(6)( 6) mastocyty) mastocyty.
    • Względny stosunek każdego mediatora w komórkach tucznych napletka noworodka do tego w komórkach tucznych napletka dorosłego jest najwyższy dla histaminy, następnie tryptazy, a następnie chimazy. Tryptaza z komórek tucznych TC i T miała identyczny skład podjednostek w analizie Western blot i podobne widoczne aktywności specyficzne. Badanie to rozszerza wcześniej opisane immunohistochemiczne rozróżnienie między ludzkimi komórkami tucznymi T i TC w skrawkach tkankowych przez bezpośrednie oznaczenie ilościowe chymazy i tryptazy w rozproszonych preparatach komórek tucznych T i TC.

Specyficzność substratowa aktywności cis-trans izomerazy peptydyloprolilowej cyklofiliny i białka wiążącego FK-506: dowód na istnienie rodziny różnych enzymów.

  1. U ssaków rodzina endotelin (ET) obejmuje trzy endogenne izoformy: ET-1, ET-2 i ET-3. ET-1 jest główną izoformą w ludzkim układzie sercowo-naczyniowym i pozostaje najsilniejszym i najdłużej odkrytym czynnikiem zwężającym naczynia ludzkie.
  2. U ludzi endoteliny pośredniczą w ich działaniach za pośrednictwem tylko dwóch typów receptorów, które zostały sklonowane i sklasyfikowane jako receptory ET(A) i ET(B) w pierwszym raporcie NC-IUPHAR (International Union of Pharmacology Committee on Receptor Nomenclature and Drug Classification) w sprawie nomenklatury w 1994 roku.
  3. Ten raport został skompilowany przed odkryciem większości antagonistów receptora endoteliny (zwłaszcza niepeptydów) obecnie stosowanych w charakterystyce receptorów i obecnie zaktualizowany w niniejszym przeglądzie.
  4. Receptory endoteliny nadal klasyfikuje się zgodnie z ich rangą siły działania dla trzech endogennych izoform endoteliny. Nie odkryto selektywnego agonisty receptora ET(A), ale wysoce selektywni antagoniści obejmują peptydy (BQ123, cyklo-[D-Asp-L-Pro-D-Val-L-Leu-D-Trp-]; FR139317, N – [(heksahydro-1-azepinylo)karbonylo]L-Leu(1-Me)D-Trp-3(2-pirydylo)-D- Ala ) i ogólnie silniejsze niepeptydy, takie jak PD156707, SB234551, L754142, A127722 oraz TBC11251. Sarafotoksyna S6c, BQ3020 ([ Ala (11,15)]Ac-ET-1((6-21)) i IRL1620 [ Suc -(Glu(9),  Ala (11,15))-ET-1( (8-21))] są szeroko stosowanymi syntetycznymi agonistami receptora ET(B).
  5. Opracowano również ograniczoną liczbę peptydowych (BQ788) i niepeptydowych (A192621) antagonistów ET(B). Są one na ogół słabsze niż antagoniści ET(A) i wykazują niższą selektywność (zwykle tylko 1 do 2 rzędów wielkości) wobec receptora ET(B). Radioligandy wysoce selektywne wobec receptorów ET(A) ((125)I-PD151242, (125)I-PD164333 i (3)H-BQ123) lub ET(B) ((125)I-BQ3020 i (125)I -IRL1620) dodatkowo skonsolidowały klasyfikację tylko na te dwa typy, bez mocnych dowodów molekularnych lub farmakologicznych na poparcie istnienia dalszych receptorów u ssaków.

Białko mip Legionella pneumophila wykazuje aktywność izomerazy peptydylo-prolilo-cis/trans (PPlaza).

  • Legionella pneumophila jest pasożytem wewnątrzkomórkowym, zdolnym do przeżycia i namnażania się w ludzkich monocytach i makrofagach pęcherzykowych. Wykazano, że białko Mip (potencjator zakaźności makrofagów) jest istotnym czynnikiem wirulencji.
  • Poszukiwanie baz danych kwasów nukleinowych po translacji wykazało, że białko Mip ze szczepu Wadsworth posiada regiony homologiczne do tych występujących w białkach wiążących FK506 (FKBP) kilku różnych organizmów eukariotycznych.
  • FKBP są zdolne do wiązania się z immunosupresyjnym makrolidem FK506 i posiadają aktywność cis/trans izomerazy peptydylo-prolilowej (PPIazy). Gen kodujący białko Mip został sklonowany z chromosomu szczepu Philadelphia I L. pneumophila i zsekwencjonowany.
  • Został zsyntetyzowany w Escherichia coli K-12 i po oczyszczeniu wykazywał aktywność PPIazy katalizującą powolną izomeryzację cis/trans prolilowych wiązań peptydowych w oligopeptydach. Mip jest hamowany przez FK506 i jest w pełni oporny na cyklosporynę A, co stwierdzono również w przypadku niedawno scharakteryzowanych PPIaz typu FKBP eukariontów.
  • Jednak N-końcowe wydłużenie Mip i/lub podstawienie zmiennych aminokwasów w C-końcowym rdzeniu FKBP prowadzi do różnic w specyficzności substratowej w porównaniu z eukariotycznymi FKBP z substratami oligopeptydowymi typu  Suc – Ala –Xaa -Pro-Phe-4-nitroanilid.
  • Niemniej jednak czynnik Legionella Mip reprezentuje produkt genu bakteryjnego, który ma pewne cechy normalnie występujące w białkach eukariotycznych. Ze względu na aktywność PPIaz w reakcjach fałdowania białek, takie prokariotyczne analogi FKBP mogą reprezentować nową klasę czynników patogenności bakterii.

Izomeraza peptydylo-prolilowa cis/trans związana z rybosomami zidentyfikowana jako czynnik wyzwalający.

  • Izomerazy cis/trans peptydylo-prolilowe (PPIazy) są enzymami, które katalizują fałdowanie białek zarówno in vitro, jak i in vivo. Wyizolowaliśmy peptydylo-prolilową izomerazę cis/trans (PPIaza), która jest specyficznie związana z podjednostką 50S rybosomu Escherichia coli.
  • To powiązanie zostało zniesione przez dodanie co najmniej 1,5 M LiCl. Sekwencjonowanie N-końcowych aminokwasów w połączeniu z trzema fragmentami proteolitycznymi o łącznej liczbie 62 aminokwasów ujawniło, że ta PPIaza jest identyczna z czynnikiem wyzwalającym E. coli. Porównanie sekwencji aminokwasowej czynnika wyzwalającego z sekwencjami innych rodzin PPIaz wykazuje niewielkie podobieństwa, co sugeruje, że czynnik wyzwalający może reprezentować dodatkową rodzinę PPIaz.
  • Czynnik wyzwalający oczyszczono do jednorodności w skali preparatywnej z E.coli i zbadano jego właściwości enzymatyczne. W swoim działaniu wobec substratów oligopeptydowych czynnik wyzwalający przypomina białka wiążące FK506 (FKBP). Dodatkowo wzór specyficzności submiejsc względem aminokwasu poprzedzającego prolinę w  Suc – Ala -Xaa-Pro-Phe-4-nitroanilidach przypomina FKBP.

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA

L-1400.0050 Bachem 50.0mg 151 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA

L-1400.0250 Bachem 250.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA

L-1400.1000 Bachem 1.0g 1118 EUR

Suc-Ala-Phe-Pro-Phe-pNA

L-1605.0050 Bachem 50.0mg 454 EUR

Suc-Ala-Phe-Pro-Phe-pNA

L-1605.0250 Bachem 250.0mg 1723 EUR

Suc-Ala-Ala-Phe-pNA

L-1580.0250 Bachem 250.0mg 877 EUR

Suc-Ala-Ala-Phe-pNA

L-1580.1000 Bachem 1.0g 2569 EUR

Suc-Phe-Ala-Ala-Phe-pNA

L-1675.0050 Bachem 50.0mg 151 EUR

Suc-Phe-Ala-Ala-Phe-pNA

L-1675.0250 Bachem 250.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Ala-pNA

L-1775.0250 Bachem 250.0mg 660 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Ala-pNA

L-1775.1000 Bachem 1.0g 1917 EUR

Suc-Ala-Gly-Pro-Phe-pNA

L-1590.0050 Bachem 50.0mg 273 EUR

Suc-Ala-Gly-Pro-Phe-pNA

L-1590.0250 Bachem 250.0mg 998 EUR

Suc-Ala-His-Pro-Phe-pNA

L-1595.0050 Bachem 50.0mg 454 EUR

Suc-Ala-His-Pro-Phe-pNA

L-1595.0250 Bachem 250.0mg 1723 EUR

Suc-Ala-Gln-Pro-Phe-pNA

L-1600.0050 Bachem 50.0mg 708 EUR

Suc-Ala-Gln-Pro-Phe-pNA

L-1600.0250 Bachem 250.0mg 2739 EUR

Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-pNA

L-1620.0050 Bachem 50.0mg 273 EUR

Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-pNA

L-1620.0250 Bachem 250.0mg 998 EUR

Suc-Ala-Val-Pro-Phe-pNA

L-1625.0050 Bachem 50.0mg 576 EUR

Suc-Ala-Val-Pro-Phe-pNA

L-1625.0250 Bachem 250.0mg 2207 EUR

Suc-Ala-Lys-Pro-Phe-pNA

L-1630.0050 Bachem 50.0mg 708 EUR

Suc-Ala-Lys-Pro-Phe-pNA

L-1630.0250 Bachem 250.0mg 2739 EUR

Suc-Ala-Glu-Pro-Phe-pNA

L-1635.0050 Bachem 50.0mg 563 EUR

Suc-Ala-Glu-Pro-Phe-pNA

L-1635.0250 Bachem 250.0mg 2159 EUR

Suc-Ala-Ile-Pro-Phe-pNA

L-1665.0050 Bachem 50.0mg 576 EUR

Suc-Ala-Ile-Pro-Phe-pNA

L-1665.0250 Bachem 250.0mg 2207 EUR

Suc-Ala-Trp-Pro-Phe-pNA

L-1670.0050 Bachem 50.0mg 708 EUR

Suc-Ala-Trp-Pro-Phe-pNA

L-1670.0250 Bachem 250.0mg 2739 EUR

Suc-Ala-Pro-pNA

L-2090.0050 Bachem 50.0mg 454 EUR

Suc-Ala-Pro-pNA

L-2090.0250 Bachem 250.0mg 1723 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-pNA

L-1390.0050 Bachem 50.0mg 151 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-pNA

L-1390.0250 Bachem 250.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Leu-pNA

L-1390.1000 Bachem 1.0g 1118 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Met-pNA

L-1395.0050 Bachem 50.0mg 334 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Met-pNA

L-1395.0250 Bachem 250.0mg 1180 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Glu-pNA

L-1710.0050 Bachem 50.0mg 563 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Glu-pNA

L-1710.0250 Bachem 250.0mg 2159 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Arg-pNA

L-1720.0050 Bachem 50.0mg 660 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Arg-pNA

L-1720.0250 Bachem 250.0mg 2545 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Lys-pNA

L-1725.0050 Bachem 50.0mg 563 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Lys-pNA

L-1725.0250 Bachem 250.0mg 2159 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA

L-1770.0250 Bachem 250.0mg 660 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA

L-1770.1000 Bachem 1.0g 1917 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Nva-pNA

L-1780.0250 Bachem 250.0mg 708 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Nva-pNA

L-1780.1000 Bachem 1.0g 2062 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Ile-pNA

L-1790.0250 Bachem 250.0mg 841 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Ile-pNA

L-1790.1000 Bachem 1.0g 2461 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Asp-pNA

L-1835.0050 Bachem 50.0mg 708 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Asp-pNA

L-1835.0250 Bachem 250.0mg 2739 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Abu-pNA

L-2160.0500 Bachem 0.5mg 60 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Abu-pNA

L-2160.1000 Bachem 1.0mg 83 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-AMC

I-1465.0050 Bachem 50.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-AMC

I-1465.0250 Bachem 250.0mg 1482 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-SBzl

M-1735.0050 Bachem 50.0mg 877 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-SBzl

M-1735.0250 Bachem 250.0mg 3416 EUR

Suc-Ala-Ala-pNA

L-1505.0250 Bachem 250.0mg 225 EUR

Suc-Ala-Ala-pNA

L-1505.1000 Bachem 1.0g 611 EUR

Suc-Ala-Ala-Ala-pNA

L-1385.0250 Bachem 250.0mg 225 EUR

Suc-Ala-Ala-Ala-pNA

L-1385.1000 Bachem 1.0g 611 EUR

Suc-APA-pNA peptide [Suc-Ala-Pro-Ala-pNA; MW: 477.5]

SP-51205-1 Alpha Diagnostics 1 mg 141 EUR

Ac-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA

L-1010.0050 Bachem 50.0mg 576 EUR

Ac-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA

L-1010.0250 Bachem 250.0mg 2207 EUR

Suc-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-pNA

L-1325.0025 Bachem 25.0mg 708 EUR

Suc-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-pNA

L-1325.0100 Bachem 100.0mg 2061 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-2,4-difluoroanilide

M-2305.0050 Bachem 50.0mg 841 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-2,4-difluoroanilide

M-2305.0250 Bachem 250.0mg 3270 EUR

Suc-Ala-Ala-Val-Ala-pNA

L-1410.0050 Bachem 50.0mg 151 EUR

Suc-Ala-Ala-Val-Ala-pNA

L-1410.0250 Bachem 250.0mg 515 EUR

Suc-Ala-Ala-Val-pNA

L-1405.0050 Bachem 50.0mg 151 EUR

Suc-Ala-Ala-Val-pNA

L-1405.0250 Bachem 250.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Ala-Val-pNA

L-1405.1000 Bachem 1.0g 1118 EUR

H-Ala-Phe-Pro-pNA

L-1795.0050 Bachem 50.0mg 236 EUR

H-Ala-Phe-Pro-pNA

L-1795.0250 Bachem 250.0mg 853 EUR

H-Phe-Pro-Ala-pNA

L-1800.0050 Bachem 50.0mg 297 EUR

H-Phe-Pro-Ala-pNA

L-1800.0250 Bachem 250.0mg 1093 EUR

Suc-Ala-Ala-Phe-AMC

I-1315.0050 Bachem 50.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Ala-Phe-AMC

I-1315.0250 Bachem 250.0mg 1482 EUR

Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-AMC

I-1695.0050 Bachem 50.0mg 393 EUR

Suc-Ala-Leu-Pro-Phe-AMC

I-1695.0250 Bachem 250.0mg 1482 EUR

Suc-Ala-Glu-Pro-Phe-AMC

I-1750.0050 Bachem 50.0mg 841 EUR

Suc-Ala-Glu-Pro-Phe-AMC

I-1750.0250 Bachem 250.0mg 3270 EUR

Suc-Ala-Pro-Ala-AMC

I-1335.0050 Bachem 50.0mg 683 EUR

Suc-Ala-Pro-Ala-AMC

I-1335.0250 Bachem 250.0mg 2642 EUR

Suc-Phe-Pro-Phe-pNA

L-1430.0250 Bachem 250.0mg 841 EUR

Suc-Phe-Pro-Phe-pNA

L-1430.1000 Bachem 1.0g 2461 EUR

Boc-Ala-Ala-Pro-Ala-pNA

L-1180.0050 Bachem 50.0mg 357 EUR

Boc-Ala-Ala-Pro-Ala-pNA

L-1180.0250 Bachem 250.0mg 1336 EUR

H-Ala-Ala-Phe-pNA

L-1095.0050 Bachem 50.0mg 115 EUR

H-Ala-Ala-Phe-pNA

L-1095.0250 Bachem 250.0mg 368 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC

I-1490.0050 Bachem 50.0mg 841 EUR

Suc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC

I-1490.0250 Bachem 250.0mg 3270 EUR

Suc-Val-Pro-Phe-pNA

L-1755.0050 Bachem 50.0mg 841 EUR

Suc-Val-Pro-Phe-pNA

L-1755.0250 Bachem 250.0mg 3270 EUR

H-Ala-Ala-Pro-pNA · HCl

L-1100.0050 Bachem 50.0mg 576 EUR

H-Ala-Ala-Pro-pNA · HCl

L-1100.0250 Bachem 250.0mg 2207 EUR

MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA

L-1335.0050 Bachem 50.0mg 334 EUR

MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA

L-1335.0250 Bachem 250.0mg 1180 EUR

H-Ala-Pro-pNA

L-1115.0250 Bachem 250.0mg 176 EUR

H-Ala-Pro-pNA

L-1115.1000 Bachem 1.0g 466 EUR

Jednak aktywność PPIazy czynnika wyzwalającego nie była hamowana ani przez FK506, ani przez cyklosporynę A w stężeniach do 100 mikroM. In vitro czynnik wyzwalający katalizował ograniczone proliną ponowne fałdowanie wariantu RNazy T1 znacznie lepiej niż wszystkie inne PPIazy, które do tej pory zbadano.

Leave a Reply

Your email address will not be published.