• 9 czerwca, 2022

Zaburzające naczynia naczyniowe skutki elektroporacji i elektrochemioterapii

    1. lektrochemioterapia ma bezpośredni wpływ cytotoksyczny na komórki nowotworowe i przypuszczalnie ma działanie uszkadzające naczynia. W tym badaniu, na podstawie przewidywania modelu matematycznego, przeprowadzono ocenę histologiczną i pomiary fizjologiczne guzów w celu potwierdzenia, że ​​elektroporacja i elektrochemioterapia guzów mają działanie uszkadzające naczynia. W badaniu lite guzy podskórnego mięsaka SA-1 u myszy A/J leczono bleomycyną (BLM) podawaną dożylnie (1 mg kg(-1)), stosując impulsy elektryczne (8 impulsów, 1040 V, 100 mikronów, 1 Hz) lub połączenie obu – elektrochemioterapia.
    2. Efekt naczyniowy określono za pomocą laserowej przepływomierzy Dopplera, ultrasonografii dopplera mocy i   barwienia błękitem patentowym. Stopień niedotlenienia guza określono immunohistochemicznie za pomocą markera hipoksji pimonidazolu i ciśnienia parcjalnego tlenu (pO(2)) w guzach za pomocą oksymetrii elektronowego rezonansu paramagnetycznego.
    3. Elektrochemioterapia z BLM wywołała dobry efekt przeciwnowotworowy w ciągu 22 dni, opóźnienie wzrostu guza i 38% wyleczenie guza. Zastosowanie impulsów elektrycznych do guzów wywołało  natychmiastowe ,  ale przemijające zmniejszenie przepływu krwi przez guz (o 70%), które odzyskano w ciągu 24 godzin. Podczas tego zmniejszenia przepływu krwi przez guz stwierdziliśmy wzrost hipoksji obszaru guza do 30%, co znalazło również odzwierciedlenie w zmniejszeniu utlenowania guza (o 70%).
    4. Zgodnie z opisanym modelem matematycznym komórki śródbłonka wyścielające naczynia krwionośne guza są eksponowane na około 40% wyższe pole elektryczne niż otaczające komórki guza, a zatem łatwo poddają się elektroporacji, umożliwiając dostęp do cytozolu o wysokim stężeniu BLM.
    5. W związku z tym elektrochemioterapia oprócz natychmiastowego działania uszkadzającego naczynia ma również działanie opóźnione (po 24 h), w wyniku obrzęku komórek śródbłonka i apoptozy objawiającej się rozległą martwicą guza, niedotlenieniem guza, przedłużoną redukcją przepływu krwi przez guz i znacznym wzrostem guza opóźnienie i wyleczenia guza.
    6. Nasze wyniki pokazują, że oprócz dobrze ugruntowanego bezpośredniego działania cytotoksycznego na komórki nowotworowe, elektrochemioterapia ma również pośrednie działanie uszkadzające naczynia krwionośne, co prowadzi do rozległej martwicy komórek nowotworowych prowadzącej do całkowitej regresji guzów.

    Dowody na prysznice mutacji.

    • Mutanty w systemie myszy transgenicznych Big  Blue  wykazują spontaniczne skupienia wielokrotnych mutacji o nieoczekiwanie wysokiej częstotliwości, zgodnej ze zdarzeniami chronokoordynacyjnymi.
    • Przetestowaliśmy przewidywanie, że wielokrotne mutacje obserwowane w docelowej mutacji lacI czasami występują w kontekście wielokrotnych mutacji chronokoordynacyjnych obejmujących wiele kilozasad (strumyki mutacji).
    • Dodatkowe sekwencjonowanie mutantów przeprowadzono w regionach bezpośrednio flankujących region lacI (łącznie 10,7 kb).
    • Dziewiętnaście dodatkowych mutacji znaleziono poza regionem lacl („ektomutacje”) z 10 mutantów zawierających dwie lub więcej mutacji lacl, podczas gdy tylko jedną ektomutację znaleziono w 130 mutacjach z pojedynczą mutacją (P <0,0001).
    • Prysznice mutacji miały średnio około jednej mutacji na 3 kb. Cztery mutanty wykazały blisko rozmieszczone podwójne mutacje w nowej sekwencji, a analiza odstępów między tymi mutacjami ujawniła znaczne skupienia (P = 0,0098).
    • Aby określić zasięg strumieni mutacji, zsekwencjonowano regiony (łącznie 8,5 kb) odległe od regionu lacI (w odległości około 16-17 kb). W tych odległych regionach znaleziono tylko dwie dodatkowe ektomutacje, co jest zgodne z prysznicami mutacji, które generalnie nie rozciągają się na więcej niż około 30 kb.
    • Dochodzimy do wniosku, że prysznice mutacji istnieją i stanowią co najmniej 0,2%, a prawdopodobnie 1% lub więcej zdarzeń mutacyjnych obserwowanych w tym systemie. Istnienie strumieni mutacji ma implikacje dla onkogenezy i ewolucji, zwiększając możliwości „raku w jednej  chwili ” i „intronów jako gąbek w celu zmniejszenia szkodliwego wpływu strumieni mutacji”.

    W mazi stawowej w ostrej fazie urazu stawu kolanowego (hemarthrosis) obserwuje się podwyższenie markerów chrząstki i kości oraz cytokin zapalnych – analiza przekrojowa.

    1. Celem tego badania przekrojowego było zbadanie stężeń markerów chrząstki i kości oraz prozapalnych cytokin w płynie maziowym (SF) pobranym w różnych punktach czasowych z ostrych kontuzji kolan z hemarthrosis i porównanie ich ze stężeniami SF w kolanach osób zdrowych, dobranych pod względem wieku i płci.
    2. SF odessano z ostrego urazu kolana u 111 osób (średni wiek 27 lat, rozpiętość 13-64 lata, 22% kobiet). Stężenia siarczanowanych glikozaminoglikanów (sGAG) mierzono za pomocą  wytrącania błękitem Alcian  , podczas gdy chrząstka ARGS, biomarkery kości [osteokalcyna (OCL), wydzielane białko o kwasowym i bogatym w cysteinę (SPARC) i osteopontynę (OPN)] oraz prozapalne cytokiny [interleukina (IL) )-1β, IL-6, IL-8 i czynnik martwicy nowotworu (TNF)-α] analizowano metodą elektrochemiluminescencji. Próbki analizowano również pod kątem czasu między urazem a aspiracją [ten sam dzień (n = 29), 1 dzień (n = 31), 2-3 dni (n = 19), 4-7 dni (n = 20) i 8 -23 dni (n = 12)].
    3. Stężenia SF ARGS (P < 0,001), SPARC (P < 0,001), OPN (P < 0,001) i wszystkich cytokin (P < 0,001), ale nie sGAG (P = 0,06) lub OCL (P = 0,992) istotnie wyższy w uszkodzonych kolanach w porównaniu z kolanami osób referencyjnych. Markery chrząstki sGAG i ARGS były istotnie wyższe w kolanach aspirowanych później niż 1 dzień po urazie, podczas gdy stężenia SPARC i OPN oraz wszystkich cytokin były wyższe w kolanach aspirowanych tego samego dnia co uraz i we wszystkich późniejszych punktach czasowych.
    4. Nasze wyniki sugerują, że ostre uszkodzenie kolana wiąże się z natychmiastową lokalną reakcją biochemiczną na uraz, która może wpływać na chrząstki i kości, a także na aktywność zapalną.

    Magnetoelektroporacja: ulepszone znakowanie nerwowych komórek macierzystych i leukocytów do obrazowania komórkowego rezonansu magnetycznego przy użyciu jednego środka zatwierdzonego przez FDA.

    • Obrazowanie metodą komórkowego rezonansu magnetycznego (MRI) opiera się na zastosowaniu wewnątrzkomórkowych środków kontrastowych, głównie związków tlenku żelaza. Zastosowano kilka technik, aby skutecznie przenosić tlenki żelaza do komórek niefagocytujących, ale wszystkie dotychczas stosowane metody wymagają przedłużonej inkubacji komórek. Postawiliśmy hipotezę, że  natychmiastowe  znakowanie magnetyczne komórek można osiągnąć za pomocą elektroporacji.
    • Nerwowe komórki macierzyste (NSC) i leukocyty ze śledziony i węzłów chłonnych zawieszono w roztworze znakującym tlenkiem żelaza, załadowano do kuwet i poddano elektromechanicznej permeabilizacji za pomocą elektroporacji.
    • Komórki znakowane magnetycznie badano pod kątem wydajności znakowania, a także potencjalnej toksyczności lub zmienionej funkcji. Aby potwierdzić przydatność metody do wykrywania komórek, przeprowadzono eksperymenty MRI przy 11,7 T. Magnetoelektroporacja NSC, jak wykazano za pomocą  barwienia błękitem pruskim  , barwienia immunologicznego antydekstranem i ilościowego testu wychwytu żelaza, okazała się skuteczną metodą wewnątrzkomórkowego znakowania magnetycznego.
    • Leukocyty, w tym limfocyty, które są notorycznie trudne do znakowania ze względu na ich właściwości błony i małą objętość cytoplazmy, również wykazywały wyraźny wychwyt ferumoksydu.

InstantBlue 1L (Instant Blue)

ISB1L Expedeon 1L bottle 198 EUR

1L ProtoStain Blue

NAT1112 Scientific Laboratory Supplies 1L 118.56 EUR

OPTIONAL BLUE FILTER (497NM)

GDBL-BLUE CORNING 1/pk 1298.4 EUR

conversion screen uv/blue

VLFC26-BLUE Consort ea 727.2 EUR

SDS-Blue™ - Coomassie based solution for protein staining in SDS-PAGE

04-GSB Gentaur Genprice
  • 144.00 EUR
  • 96.00 EUR
  • 1L
  • 500mL

Corning Reagent Bottle 1L PP

1500P-1L Scientific Laboratory Supplies PK10 118.56 EUR

Ice pan mini 1L blue

432116 Scientific Laboratory Supplies EACH 82.08 EUR

Flystuff (66-117) Nutri-fly Instant Makes 1L

FLY1188 Scientific Laboratory Supplies EACH 33.06 EUR

BEAKER,1L,PLASTIC,LOW FORM,PP,6/6

1000P-1L CORNING 6/pk 75.6 EUR

BEAKER,1L,PLASTIC,LOW FORM,PFA,1/6

1003P-1L CORNING 1/pk 783.6 EUR

BEAKER,1L,WITH HANDLE AND SPOUT,PP,12/12

1015P-1L CORNING 12/pk 139.2 EUR

Diss Media Conc Hydrochloric Acid 0.01N (1L to 40L)

DBC10-1L Scientific Laboratory Supplies PK6 449.16 EUR

Diss Media Conc Hydrochloric Acid 0.1N (1L to 40L)

DBC11-1L Scientific Laboratory Supplies PK6 449.16 EUR

Methylene Blue solution, 0.5% in water

GT8594-1L Glentham Life Sciences 1 l 60 EUR

Diss Media Conc K Phosph pH 6.0 (1L to 40L)

DBC02-1L Scientific Laboratory Supplies PK6 449.16 EUR

Diss Media Conc K Phosph pH 7.2 (1L to 40L)

DBC04-1L Scientific Laboratory Supplies PK6 449.16 EUR

Diss Media Conc K Phosph pH 7.5 (1L to 40L)

DBC05-1L Scientific Laboratory Supplies PK6 449.16 EUR

Diss Media Conc Na Lauryl Sulphate 0.50% (1L to 20L)

DBC07-1L Scientific Laboratory Supplies 1L 82.08 EUR

Diss Media Conc K Phosph pH 8.0 (1L to 40L)

DBC42-1L Scientific Laboratory Supplies PK6 449.16 EUR

SLS pH Buffer Coloured Blue pH10 1L

PHB1304 Scientific Laboratory Supplies EACH 31.81 EUR

SLS pH Buffer Coloured Blue pH10 1L

PHB1314 Scientific Laboratory Supplies EACH 39.9 EUR

One-Step Blue Protein Gel Stain, 1X

21003-1L Biotium 1L 178.8 EUR

Diss Media Conc K Phosph pH 4.5 (1L of to 40L)

DBC40-1L Scientific Laboratory Supplies PK6 449.16 EUR

Diss Media Conc K Phosph pH 7.1 (1L of to 40L)

DBC41-1L Scientific Laboratory Supplies PK6 449.16 EUR

CYLINDER,GRAD,1L,PLASTIC,SINGLE METRIC SCALE,PP,TC W/FUNNEL,1/6

3022P-1L CORNING 1/pk 193.2 EUR

VOL FLASK,1L,PLASTIC,CLASS A,PMP,24/29 TAPERED PP STOPPER,1/3

5640P-1L CORNING 1/pk 159.6 EUR

VOL FLASK,1L,PLASTIC,CLASS B,PP,24/29 TAPERED PP STOPPER,1/3

5641P-1L CORNING 1/pk 145.2 EUR

1L Hanna pH 6.86 buffer 1L

HI70061L Scientific Laboratory Supplies 1L 29.64 EUR

1L HarrisHematoxylin

NAT1338 Scientific Laboratory Supplies 1L 100.32 EUR

1L Autofluor

NAT1446 Scientific Laboratory Supplies 1L 223.44 EUR

Sharpsbin 1L

SAF7352 Scientific Laboratory Supplies EACH 3.42 EUR

Percoll 1L

17089101 Scientific Laboratory Supplies EACH 425.22 EUR

Beaker Brushes, 1L

BR007-1K Bio Basic 1 UNIT 64.18 EUR

SLINGSHOT-1L Antibody

48407-100ul SAB 100ul 399.6 EUR

SLINGSHOT-1L Antibody

48407-50ul SAB 50ul 286.8 EUR

SLINGSHOT-1L Antibody

abx016133-100ug Abbexa 100 ug 493.2 EUR

SLINGSHOT-1L Antibody

abx224128-100ug Abbexa 100 ug 493.2 EUR

1L-chiro-Inositol

GC7626-100MG Glentham Life Sciences 100 mg 122.4 EUR

1L-chiro-Inositol

GC7626-1G Glentham Life Sciences 1 g 322.8 EUR

Dermcidin-1L (human)

H-7316.0500 Bachem 0.5mg 212.4 EUR

Dermcidin-1L (human)

H-7316.1000 Bachem 1.0mg 352.8 EUR

1L Flask Clamp

MIX1332 Scientific Laboratory Supplies EACH 30.78 EUR

1L Tween 20

NAT1084 Scientific Laboratory Supplies 1L 124.26 EUR

1L ProtoBlue Safe

NAT1108 Scientific Laboratory Supplies 1L 112.86 EUR

1L AcrylaGel 30%

NAT1118 Scientific Laboratory Supplies 1L 133.38 EUR

1L SequaGel XR

NAT1162 Scientific Laboratory Supplies 1L 119.7 EUR

1L TBE 10X

NAT1196 Scientific Laboratory Supplies 1L 44 EUR

1L TBE 5X

NAT1200 Scientific Laboratory Supplies 1L 36.82 EUR

1L Denaturation Solution

NAT1232 Scientific Laboratory Supplies 1L 48.79 EUR

1L Neutralization Solution

NAT1234 Scientific Laboratory Supplies 1L 48.79 EUR

1L ProtoGel (30%)

NAT1260 Scientific Laboratory Supplies 1L 135.66 EUR

1L ProtoGel (40%)

NAT1264 Scientific Laboratory Supplies 1L 161.88 EUR

1L Scotts Tapwater

NAT1342 Scientific Laboratory Supplies 1L 34.54 EUR

1L Oxosol 306

NAT1382 Scientific Laboratory Supplies 1L 86.64 EUR

Flask Receiving 1L

EVA5012 Scientific Laboratory Supplies EACH 204.06 EUR

Arsenite 0.05M 1L

SA2005F Scientific Laboratory Supplies 1L 101.46 EUR

Stainless Container 1L

SAM1111 Scientific Laboratory Supplies EACH 263.34 EUR

Scoop 1L Polypropylene

SCO1016 Scientific Laboratory Supplies EACH 28.16 EUR

GL45 Flask - 1L

FLA1006 Scientific Laboratory Supplies PK10 241.68 EUR

Flask Filter 1L

FLA7724 Scientific Laboratory Supplies PK5 282.12 EUR

Beaker 1L SSteel

BEA3328 Scientific Laboratory Supplies EACH 104.88 EUR

Percoll Plus 1L

17544501 Scientific Laboratory Supplies EACH 641.82 EUR

Hellmanexcleaning concentrate 1l

CEL2106 Scientific Laboratory Supplies EACH 79.8 EUR

Dosing Bottle 1L

CLE2020 Scientific Laboratory Supplies EACH 8.16 EUR

Sepharose 6B 1L

17011001 Scientific Laboratory Supplies EACH 918.84 EUR

Sepharose 4B 1L

17012001 Scientific Laboratory Supplies EACH 918.84 EUR

Growth Medium 1L

79555 BPS Bioscience 500 ml 650 EUR

Instant Lentivirus Detection Card

K1470-10 Biovision 10 tests 454.8 EUR

Instant Lentivirus Detection Card

K1470-20 Biovision 20 tests 636 EUR

ECOS Blue (XL1-Blue

FYE107-10VL Yeastern Biotech 100 µl x 10 vials Ask for price

ECOS Blue (XL1-Blue

FYE107-80VL Yeastern Biotech 100 µl x 10 vials Ask for price

ECOS Blue (XL1-Blue

FYE108-10VL Yeastern Biotech 100 µl x 10 vials Ask for price

ECOS Blue (XL1-Blue

FYE108-80VL Yeastern Biotech 100 µl x 10 vials Ask for price

ECOS Blue (XL1-Blue

FYE109-10VL Yeastern Biotech 100 µl x 10 vials Ask for price

ECOS Blue (XL1-Blue

FYE109-80VL Yeastern Biotech 100 µl x 10 vials Ask for price

SLINGSHOT-1L Conjugated Antibody

C48407 SAB 100ul 476.4 EUR

CELL EXPANSION BAG, 1L

91-200-85 CORNING 1/pk 134.4 EUR

Kartell Jug 1L PP

JUG1002 Scientific Laboratory Supplies EACH 9.12 EUR

Jug StSteel 1L Graduated

JUG2002 Scientific Laboratory Supplies EACH 42.18 EUR

1L DEPC Treated Water

NAT1104 Scientific Laboratory Supplies 1L 69.54 EUR

1L Bis-AcrylaGel 2%

NAT1122 Scientific Laboratory Supplies 1L 60.42 EUR

1L SequaGel UreaGel Concentrate

NAT1134 Scientific Laboratory Supplies 1L 109.44 EUR

1L SequaGel UreaGel-6

NAT1146 Scientific Laboratory Supplies 1L 103.74 EUR

1L SequaGel UreaGel-8

NAT1150 Scientific Laboratory Supplies 1L 103.74 EUR

1L SequaGel UreaGel Diluent

NAT1154 Scientific Laboratory Supplies 1L 49.93 EUR

1L TAE Buffer 50X

NAT1222 Scientific Laboratory Supplies 1L 101.46 EUR

1L SSC Buffer 20X

NAT1224 Scientific Laboratory Supplies 1L 44 EUR

1L ProtoGel Resolving Buffer

NAT1268 Scientific Laboratory Supplies 1L 78.66 EUR

1L EDTA 0.5M Solution

NAT1282 Scientific Laboratory Supplies 1L 140.22 EUR

Rotating Flask 1L Quickfit

QFD1L4RE Scientific Laboratory Supplies EACH 59.91 EUR

Bibby 1L Heating Mantle

HEA6508 Scientific Laboratory Supplies EACH 479.94 EUR

Ice pan 1L square

HOM2736 Scientific Laboratory Supplies EACH 307.8 EUR

Electrode Storage Soln 1l

ESS01 Scientific Laboratory Supplies 1L 107.16 EUR

Nalgene MF75 Receiver 1L

FIL8026 Scientific Laboratory Supplies PK12 167.58 EUR

1L Sodium Hydroxide Solution

S25001SP Scientific Laboratory Supplies 1L 49.02 EUR

GL45 Baffled Flask - 1L

FLA1016 Scientific Laboratory Supplies PK10 259.92 EUR

Simax Buchner Flask 1L

FLA38040 Scientific Laboratory Supplies PK8 471.96 EUR

Erlenmeyer Flask Narrow 1L

FLA40100 Scientific Laboratory Supplies PK10 66.12 EUR

Baffled 1L Erlenmeyer Flask

FLA4196 Scientific Laboratory Supplies EACH 57.47 EUR

Nalgene 1L Flask Disposable

FLA7116 Scientific Laboratory Supplies PK6 92.34 EUR

Eksperymenty MRI wykazały, że znakowane NSC można wizualizować jako pojedyncze komórki i skupiska komórek w fantomach żelatynowych oraz jako proliferujące masy komórkowe w mózgu myszy. Opracowaliśmy wygodną technikę  błyskawicznego  magnetycznego znakowania komórek. Ponieważ magnetoelektroporacja pozwala na stosowanie tlenków ferumowych zatwierdzonych przez amerykańską Agencję ds. Żywności i Leków bez dodatkowych środków, ma doskonały potencjał do translacji klinicznej.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany. Wymagane pola są oznaczone *