• 9 czerwca, 2022

Zaburzające naczynia naczyniowe skutki elektroporacji i elektrochemioterapii

    1. lektrochemioterapia ma bezpośredni wpływ cytotoksyczny na komórki nowotworowe i przypuszczalnie ma działanie uszkadzające naczynia. W tym badaniu, na podstawie przewidywania modelu matematycznego, przeprowadzono ocenę histologiczną i pomiary fizjologiczne guzów w celu potwierdzenia, że ​​elektroporacja i elektrochemioterapia guzów mają działanie uszkadzające naczynia. W badaniu lite guzy podskórnego mięsaka SA-1 u myszy A/J leczono bleomycyną (BLM) podawaną dożylnie (1 mg kg(-1)), stosując impulsy elektryczne (8 impulsów, 1040 V, 100 mikronów, 1 Hz) lub połączenie obu – elektrochemioterapia.
    2. Efekt naczyniowy określono za pomocą laserowej przepływomierzy Dopplera, ultrasonografii dopplera mocy i   barwienia błękitem patentowym. Stopień niedotlenienia guza określono immunohistochemicznie za pomocą markera hipoksji pimonidazolu i ciśnienia parcjalnego tlenu (pO(2)) w guzach za pomocą oksymetrii elektronowego rezonansu paramagnetycznego.
    3. Elektrochemioterapia z BLM wywołała dobry efekt przeciwnowotworowy w ciągu 22 dni, opóźnienie wzrostu guza i 38% wyleczenie guza. Zastosowanie impulsów elektrycznych do guzów wywołało  natychmiastowe ,  ale przemijające zmniejszenie przepływu krwi przez guz (o 70%), które odzyskano w ciągu 24 godzin. Podczas tego zmniejszenia przepływu krwi przez guz stwierdziliśmy wzrost hipoksji obszaru guza do 30%, co znalazło również odzwierciedlenie w zmniejszeniu utlenowania guza (o 70%).
    4. Zgodnie z opisanym modelem matematycznym komórki śródbłonka wyścielające naczynia krwionośne guza są eksponowane na około 40% wyższe pole elektryczne niż otaczające komórki guza, a zatem łatwo poddają się elektroporacji, umożliwiając dostęp do cytozolu o wysokim stężeniu BLM.
    5. W związku z tym elektrochemioterapia oprócz natychmiastowego działania uszkadzającego naczynia ma również działanie opóźnione (po 24 h), w wyniku obrzęku komórek śródbłonka i apoptozy objawiającej się rozległą martwicą guza, niedotlenieniem guza, przedłużoną redukcją przepływu krwi przez guz i znacznym wzrostem guza opóźnienie i wyleczenia guza.
    6. Nasze wyniki pokazują, że oprócz dobrze ugruntowanego bezpośredniego działania cytotoksycznego na komórki nowotworowe, elektrochemioterapia ma również pośrednie działanie uszkadzające naczynia krwionośne, co prowadzi do rozległej martwicy komórek nowotworowych prowadzącej do całkowitej regresji guzów.

    Dowody na prysznice mutacji.

    • Mutanty w systemie myszy transgenicznych Big  Blue  wykazują spontaniczne skupienia wielokrotnych mutacji o nieoczekiwanie wysokiej częstotliwości, zgodnej ze zdarzeniami chronokoordynacyjnymi.
    • Przetestowaliśmy przewidywanie, że wielokrotne mutacje obserwowane w docelowej mutacji lacI czasami występują w kontekście wielokrotnych mutacji chronokoordynacyjnych obejmujących wiele kilozasad (strumyki mutacji).
    • Dodatkowe sekwencjonowanie mutantów przeprowadzono w regionach bezpośrednio flankujących region lacI (łącznie 10,7 kb).
    • Dziewiętnaście dodatkowych mutacji znaleziono poza regionem lacl („ektomutacje”) z 10 mutantów zawierających dwie lub więcej mutacji lacl, podczas gdy tylko jedną ektomutację znaleziono w 130 mutacjach z pojedynczą mutacją (P <0,0001).
    • Prysznice mutacji miały średnio około jednej mutacji na 3 kb. Cztery mutanty wykazały blisko rozmieszczone podwójne mutacje w nowej sekwencji, a analiza odstępów między tymi mutacjami ujawniła znaczne skupienia (P = 0,0098).
    • Aby określić zasięg strumieni mutacji, zsekwencjonowano regiony (łącznie 8,5 kb) odległe od regionu lacI (w odległości około 16-17 kb). W tych odległych regionach znaleziono tylko dwie dodatkowe ektomutacje, co jest zgodne z prysznicami mutacji, które generalnie nie rozciągają się na więcej niż około 30 kb.
    • Dochodzimy do wniosku, że prysznice mutacji istnieją i stanowią co najmniej 0,2%, a prawdopodobnie 1% lub więcej zdarzeń mutacyjnych obserwowanych w tym systemie. Istnienie strumieni mutacji ma implikacje dla onkogenezy i ewolucji, zwiększając możliwości „raku w jednej  chwili ” i „intronów jako gąbek w celu zmniejszenia szkodliwego wpływu strumieni mutacji”.

    W mazi stawowej w ostrej fazie urazu stawu kolanowego (hemarthrosis) obserwuje się podwyższenie markerów chrząstki i kości oraz cytokin zapalnych – analiza przekrojowa.

    1. Celem tego badania przekrojowego było zbadanie stężeń markerów chrząstki i kości oraz prozapalnych cytokin w płynie maziowym (SF) pobranym w różnych punktach czasowych z ostrych kontuzji kolan z hemarthrosis i porównanie ich ze stężeniami SF w kolanach osób zdrowych, dobranych pod względem wieku i płci.
    2. SF odessano z ostrego urazu kolana u 111 osób (średni wiek 27 lat, rozpiętość 13-64 lata, 22% kobiet). Stężenia siarczanowanych glikozaminoglikanów (sGAG) mierzono za pomocą  wytrącania błękitem Alcian  , podczas gdy chrząstka ARGS, biomarkery kości [osteokalcyna (OCL), wydzielane białko o kwasowym i bogatym w cysteinę (SPARC) i osteopontynę (OPN)] oraz prozapalne cytokiny [interleukina (IL) )-1β, IL-6, IL-8 i czynnik martwicy nowotworu (TNF)-α] analizowano metodą elektrochemiluminescencji. Próbki analizowano również pod kątem czasu między urazem a aspiracją [ten sam dzień (n = 29), 1 dzień (n = 31), 2-3 dni (n = 19), 4-7 dni (n = 20) i 8 -23 dni (n = 12)].
    3. Stężenia SF ARGS (P < 0,001), SPARC (P < 0,001), OPN (P < 0,001) i wszystkich cytokin (P < 0,001), ale nie sGAG (P = 0,06) lub OCL (P = 0,992) istotnie wyższy w uszkodzonych kolanach w porównaniu z kolanami osób referencyjnych. Markery chrząstki sGAG i ARGS były istotnie wyższe w kolanach aspirowanych później niż 1 dzień po urazie, podczas gdy stężenia SPARC i OPN oraz wszystkich cytokin były wyższe w kolanach aspirowanych tego samego dnia co uraz i we wszystkich późniejszych punktach czasowych.
    4. Nasze wyniki sugerują, że ostre uszkodzenie kolana wiąże się z natychmiastową lokalną reakcją biochemiczną na uraz, która może wpływać na chrząstki i kości, a także na aktywność zapalną.

    Magnetoelektroporacja: ulepszone znakowanie nerwowych komórek macierzystych i leukocytów do obrazowania komórkowego rezonansu magnetycznego przy użyciu jednego środka zatwierdzonego przez FDA.

    • Obrazowanie metodą komórkowego rezonansu magnetycznego (MRI) opiera się na zastosowaniu wewnątrzkomórkowych środków kontrastowych, głównie związków tlenku żelaza. Zastosowano kilka technik, aby skutecznie przenosić tlenki żelaza do komórek niefagocytujących, ale wszystkie dotychczas stosowane metody wymagają przedłużonej inkubacji komórek. Postawiliśmy hipotezę, że  natychmiastowe  znakowanie magnetyczne komórek można osiągnąć za pomocą elektroporacji.
    • Nerwowe komórki macierzyste (NSC) i leukocyty ze śledziony i węzłów chłonnych zawieszono w roztworze znakującym tlenkiem żelaza, załadowano do kuwet i poddano elektromechanicznej permeabilizacji za pomocą elektroporacji.
    • Komórki znakowane magnetycznie badano pod kątem wydajności znakowania, a także potencjalnej toksyczności lub zmienionej funkcji. Aby potwierdzić przydatność metody do wykrywania komórek, przeprowadzono eksperymenty MRI przy 11,7 T. Magnetoelektroporacja NSC, jak wykazano za pomocą  barwienia błękitem pruskim  , barwienia immunologicznego antydekstranem i ilościowego testu wychwytu żelaza, okazała się skuteczną metodą wewnątrzkomórkowego znakowania magnetycznego.
    • Leukocyty, w tym limfocyty, które są notorycznie trudne do znakowania ze względu na ich właściwości błony i małą objętość cytoplazmy, również wykazywały wyraźny wychwyt ferumoksydu.

InstantBlue 1L (Instant Blue)

ISB1L Expedeon 1L bottle 165 EUR

1L ProtoStain Blue

NAT1112 National Diagnostics 1L 137 EUR

OPTIONAL BLUE FILTER (497NM)

GDBL-BLUE CORNING 1/pk 1082 EUR

conversion screen uv/blue

VLFC26-BLUE Consort ea 606 EUR

REAGENT BOTTLE, 1L, PP

1500P-1L CORNING 10/pk 100 EUR

ICE PAN, MINI, 1L BLUE

432116 CORNING 1/pk 93 EUR

BEAKER,1L,PLASTIC,LOW FORM,PP,6/6

1000P-1L CORNING 6/pk 63 EUR

BEAKER,1L,PLASTIC,LOW FORM,PFA,1/6

1003P-1L CORNING 1/pk 653 EUR

BEAKER,1L,WITH HANDLE AND SPOUT,PP,12/12

1015P-1L CORNING 12/pk 116 EUR

Methylene Blue solution, 0.5% in water

GT8594-1L Glentham Life Sciences 1 l 50 EUR

One-Step Blue Protein Gel Stain, 1X

21003-1L Biotium 1L 149 EUR

CYLINDER,GRAD,1L,PLASTIC,SINGLE METRIC SCALE,PP,TC W/FUNNEL,1/6

3022P-1L CORNING 1/pk 161 EUR

VOL FLASK,1L,PLASTIC,CLASS A,PMP,24/29 TAPERED PP STOPPER,1/3

5640P-1L CORNING 1/pk 133 EUR

VOL FLASK,1L,PLASTIC,CLASS B,PP,24/29 TAPERED PP STOPPER,1/3

5641P-1L CORNING 1/pk 121 EUR

1L HarrisHematoxylin

NAT1338 National Diagnostics 1L 123 EUR

1L Autofluor

NAT1446 National Diagnostics 1L 216 EUR

1L-chiro-Inositol

GC7626-1G Glentham Life Sciences 1 g 269 EUR

1L-chiro-Inositol

GC7626-100MG Glentham Life Sciences 100 mg 102 EUR

1L Tween 20

NAT1084 National Diagnostics 1L 141 EUR

1L ProtoBlue Safe

NAT1108 National Diagnostics 1L 133 EUR

1L AcrylaGel 30%

NAT1118 National Diagnostics 1L 148 EUR

1L SequaGel XR

NAT1162 National Diagnostics 1L 138 EUR

1L TBE 10X

NAT1196 National Diagnostics 1L 82 EUR

1L TBE 5X

NAT1200 National Diagnostics 1L 77 EUR

1L Denaturation Solution

NAT1232 National Diagnostics 1L 85 EUR

1L Neutralization Solution

NAT1234 National Diagnostics 1L 85 EUR

1L ProtoGel (30%)

NAT1260 National Diagnostics 1L 156 EUR

1L ProtoGel (40%)

NAT1264 National Diagnostics 1L 170 EUR

1L Scotts Tapwater

NAT1342 National Diagnostics 1L 75 EUR

1L Oxosol 306

NAT1382 National Diagnostics 1L 112 EUR

PLASTIC CLAMP, 1L

480152 CORNING 1/pk 73 EUR

Beaker Brushes, 1L

BR007-1K Bio Basic 1 UNIT 53.48 EUR

SLINGSHOT-1L Antibody

abx016133-100ug Abbexa 100 ug 411 EUR

SLINGSHOT-1L Antibody

abx224128-100ug Abbexa 100 ug 411 EUR

SLINGSHOT-1L Antibody

48407-100ul SAB 100ul 333 EUR

SLINGSHOT-1L Antibody

48407-50ul SAB 50ul 239 EUR

Dermcidin-1L (human)

H-7316.0500 Bachem 0.5mg 177 EUR

Dermcidin-1L (human)

H-7316.1000 Bachem 1.0mg 294 EUR

ECOS Blue (XL1-Blue

FYE107-10VL Yeastern Biotech 100 µl x 10 vials Ask for price

ECOS Blue (XL1-Blue

FYE107-80VL Yeastern Biotech 100 µl x 10 vials Ask for price

ECOS Blue (XL1-Blue

FYE108-10VL Yeastern Biotech 100 µl x 10 vials Ask for price

ECOS Blue (XL1-Blue

FYE108-80VL Yeastern Biotech 100 µl x 10 vials Ask for price

ECOS Blue (XL1-Blue

FYE109-10VL Yeastern Biotech 100 µl x 10 vials Ask for price

ECOS Blue (XL1-Blue

FYE109-80VL Yeastern Biotech 100 µl x 10 vials Ask for price

1L DEPC Treated Water

NAT1104 National Diagnostics 1L 100 EUR

1L Bis-AcrylaGel 2%

NAT1122 National Diagnostics 1L 93 EUR

1L SequaGel UreaGel Concentrate

NAT1134 National Diagnostics 1L 134 EUR

1L SequaGel UreaGel-6

NAT1146 National Diagnostics 1L 126 EUR

1L SequaGel UreaGel-8

NAT1150 National Diagnostics 1L 126 EUR

1L SequaGel UreaGel Diluent

NAT1154 National Diagnostics 1L 86 EUR

1L TAE Buffer 50X

NAT1222 National Diagnostics 1L 124 EUR

1L SSC Buffer 20X

NAT1224 National Diagnostics 1L 82 EUR

1L ProtoGel Resolving Buffer

NAT1268 National Diagnostics 1L 107 EUR

1L EDTA 0.5M Solution

NAT1282 National Diagnostics 1L 153 EUR

CELL EXPANSION BAG, 1L

91-200-85 CORNING 1/pk 112 EUR

SLINGSHOT-1L Conjugated Antibody

C48407 SAB 100ul 397 EUR

Methylene Blue

HY-14536 MedChemExpress 100mg 119 EUR

Thiazolyl Blue

HY-15924 MedChemExpress 10mM/1mL 113 EUR

Calcein Blue

HY-101887 MedChemExpress 25mg 119 EUR

Evans Blue

HY-B1102 MedChemExpress 100mg 119 EUR

Bromothymol Blue

HY-D0012 MedChemExpress 1g 119 EUR

Diphenyl Blue

HY-D0970 MedChemExpress 10mM/1mL 113 EUR

Meldola's blue

GT0259-10G Glentham Life Sciences 10 g 86 EUR

Meldola's blue

GT0259-25G Glentham Life Sciences 25 g 134 EUR

Meldola's blue

GT0259-50G Glentham Life Sciences 50 g 213 EUR

Bromochlorophenol Blue

GT2674-100MG Glentham Life Sciences 100 mg 78 EUR

Bromochlorophenol Blue

GT2674-1G Glentham Life Sciences 1 g 174 EUR

Bromophenol Blue

GT2874-100G Glentham Life Sciences 100 g 126 EUR

Bromophenol Blue

GT2874-10G Glentham Life Sciences 10 g 52 EUR

Bromophenol Blue

GT2874-25G Glentham Life Sciences 25 g 66 EUR

Bromophenol Blue

GT2874-50G Glentham Life Sciences 50 g 86 EUR

Bromophenol Blue

GT2874-5G Glentham Life Sciences 5 g 45 EUR

Hydroxynaphthol blue

GT3182-100G Glentham Life Sciences 100 g 237 EUR

Hydroxynaphthol blue

GT3182-10G Glentham Life Sciences 10 g 78 EUR

Hydroxynaphthol blue

GT3182-25G Glentham Life Sciences 25 g 110 EUR

Hydroxynaphthol blue

GT3182-50G Glentham Life Sciences 50 g 166 EUR

Bromothymol Blue

GT6837-10G Glentham Life Sciences 10 g 47 EUR

Bromothymol Blue

GT6837-25G Glentham Life Sciences 25 g 61 EUR

Bromothymol Blue

GT6837-50G Glentham Life Sciences 50 g 86 EUR

Bromothymol Blue

GT6837-5G Glentham Life Sciences 5 g 42 EUR

Xylenol Blue

GT7988-1G Glentham Life Sciences 1 g 46 EUR

Xylenol Blue

GT7988-25G Glentham Life Sciences 25 g 150 EUR

Xylenol Blue

GT7988-5G Glentham Life Sciences 5 g 78 EUR

Bromoxylenol Blue

GT8506-10G Glentham Life Sciences 10 g 142 EUR

Bromoxylenol Blue

GT8506-1G Glentham Life Sciences 1 g 46 EUR

Bromoxylenol Blue

GT8506-5G Glentham Life Sciences 5 g 94 EUR

Thymol Blue

GT9755-100G Glentham Life Sciences 100 g 150 EUR

Thymol Blue

GT9755-10G Glentham Life Sciences 10 g 50 EUR

Thymol Blue

GT9755-25G Glentham Life Sciences 25 g 70 EUR

Thymol Blue

GT9755-50G Glentham Life Sciences 50 g 94 EUR

Thymol Blue

GT9755-5G Glentham Life Sciences 5 g 42 EUR

Trypan blue

TT1140 Bio Basic 10g 65.66 EUR

Evans Blue

abx186080-125g Abbexa 125g 453 EUR

Bromophenol blue

BB2230 Bio Basic 25g 69.14 EUR

Evans Blue

20-abx082082 Abbexa
  • 175.00 EUR
  • 217.00 EUR
  • 1 g
  • 5 g

Bromphenol Blue

20-abx082184 Abbexa
  • 230.00 EUR
  • 189.00 EUR
  • 25 g
  • 5 g

Evans Blue

20-abx082237 Abbexa
  • 189.00 EUR
  • 230.00 EUR
  • 1 g
  • 5 g

Bromphenol Blue

20-abx082376 Abbexa
  • 244.00 EUR
  • 189.00 EUR
  • 25 g
  • 5 g

Toluidine Blue

abx082425-5g Abbexa 5 g 189 EUR

Trypan Blue

20-abx082476 Abbexa
  • 230.00 EUR
  • 189.00 EUR
  • 25 g
  • 5 g

Eksperymenty MRI wykazały, że znakowane NSC można wizualizować jako pojedyncze komórki i skupiska komórek w fantomach żelatynowych oraz jako proliferujące masy komórkowe w mózgu myszy. Opracowaliśmy wygodną technikę  błyskawicznego  magnetycznego znakowania komórek. Ponieważ magnetoelektroporacja pozwala na stosowanie tlenków ferumowych zatwierdzonych przez amerykańską Agencję ds. Żywności i Leków bez dodatkowych środków, ma doskonały potencjał do translacji klinicznej.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany. Wymagane pola są oznaczone *